实验技术简介：

       Hoechst染料都可在350nm左右的紫外光激发。都在461nm处发出蓝靛色荧光光。Hoechst染色时无需用 DAB来显色，它直接结合细胞的DNA ，经过紫外光激发后发出蓝色荧光。 

实验技术原理： 

       Hoechst是可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较 低。 荧光染料Hoechst能少许进入正常细胞 膜，使其染上低蓝色，而凋亡细胞的膜通透性增强，因此进入凋亡细胞中的Hoechst比正常细胞的多，荧光强度 要比正常细胞中要高，此外，凋亡细胞的染色体DNA的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与 DNA结合，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到损伤不 能有效地将Hoechst排出到细胞外使之在细胞 内积累增加等都使凋亡细胞的蓝色荧光增强。 

实验操作流程： 

1、可贴壁细胞生长于含有盖玻片的培养皿中,或将非贴壁细胞悬浮培养； 

2、将HOECHST加入培养皿,终浓度为10ug/ml,37℃孵育30min； 

3、加入4%PF,与培养液1:3混合,固定细胞5-10min； 

4、固定后将长有细胞的盖玻片用封片剂封于载玻片； 

5、荧光显微镜下观察。 

客户提供： 

1、组织样品：新鲜组织放入液氮或-80度保存，组织不少于100mg； 

2、培养细胞：通过细胞计数取不少于2×106个细胞于EP管，加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，混匀后保 存于冰箱（-80℃，避免反复冻融）； 

3、血液细胞标本：以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂， 保存（-80℃可长期保存，避免反复冻融）； 

4、血清或细胞培养液标本：离心去掉杂质后取上清入EP管，保存（4℃可保存15-20天，-80℃可长期保 存，避免反复冻融）； 

5、石蜡切片，冰冻切片以及细胞爬片，涂片等。 

6、样本运输：可选择以下任何一种方式寄送标本 - 组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后，加冰袋寄送； - 细胞样本也可直接寄送培养瓶（密封保证不污染、培养液不漏出）； - 血清或上清液直接加冰袋寄送（送视路程远近2-3天可到达）。 

交付标准： 

1、图片；

2、完整项目报告（材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果）。 

其他： 

1、Hoechst能与DNA结合，干扰DNA复制和细胞分裂，因此有致畸和致癌危险。使用和废弃需谨慎。 

2、对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待 染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。 

3、荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。 

收费标准/服务周期/提供结果： 

欢迎咨询详谈，我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。 

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