一、实验原理
DAPI 为一种荧光染料,可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用,可以产生比DAPI自身强20多倍的 荧光,和EB相比,对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞,荧光显微镜观察细胞标记 的效率高(几乎为100 %) ,且对活细胞无毒副作用。DAPI染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。 DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。细胞经热激处理后用DAPI染色3分钟,在荧光显微镜下可以看到到细胞核的形态变化。
二、实验过程
1、用PBS按照1(原液):5000(PBS)稀释DAPI原液
2、吸去细胞怕片上的细胞培养基,PBS清洗三次(不能让细胞干透)
3、用3.7%甲醛固定细胞10min
4、吸去固定剂,用PBS冲洗三次,每次5min
5、用0.2% Triton X-100使得细胞透化处理5min
6、吸去Triton,PBS清洗3次,每次5min
7、DAPI工作液室温下染色1-5min
8、吸去工作液,PBS清洗三次。
9、成像
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