平行反应监测技术（PRM）： 

       PRM是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术，能够对目标蛋白质、目标肽段（如发生翻译后修饰的肽段）进行选 择性检测，从而实现对目标蛋白质/肽段进行绝对定量。PRM技术基于Q-Orbitrap为代表的高分辨、高精度质谱平台，首先 利用四级杆质量分析器的选择能力，用Q1选择目标肽段的母离子，随后在collision cell 中对母离子进行碎裂，最后利用 Orbitrap分析器在二级质谱中检测所选择的母离子窗口内的所有碎片信息。这样即可对复杂样本中的目标蛋白质/肽段进行准 确地特异性分析。 

实验意义：

       PRM技术是针对无抗体蛋白的验证新技术，用于label free, iTRAQ, TMT, SILAC等相对定量蛋白质组数据的验证，或对复杂 样本中的目标蛋白质进行靶向定量分析。 

实验步骤： 

用PRM进行蛋白质组数据验证的一般步骤为：

用PRM对特定蛋白质进行相对/绝对定量的一般步骤为：

结果展示：

实验完成周期及交付标准： 

1.实验周期：一般PRM时间为：5-10天 

2.交付标准： 

组学验证： 

①主要仪器、试剂和实验方法。

②PRM目标离子信息：肽段序列和定量子离子。 

③方法学重复性评价：三次技术重复的色谱峰面积相对标准偏差（RSD）（预实验结果）。 

④实验结果：二级图谱，XIC图谱，原始峰面积强度值，矫正后的相对表达量，两组样本间的相对比值，t test p值。 

相对/绝对定量： 

①主要仪器、试剂和实验方法。 

②PRM目标离子信息：肽段序列和定量子离子。 

③方法学评价：相对定量的重复性评价—测试样本的三次技术重复的色谱峰面积相对标准偏差（RSD）（预实验结果）； 

绝对定量的方法学评价—标准品XIC图谱，LOD，LOQ，线性 范围，6个稀释梯度得到的标准曲线及线性公式（每个稀 释度有3次技术重复）。 

④实验结果： 

相对定量：二级图谱，XIC图谱，原始峰面积强度值，矫正后的相对表达量，两组样本间的相对比值，t test p值。

绝对定量：二级图谱，XIC图谱，原始峰面积强度值，根据标准曲线计算得到的蛋白质浓度值，两组样本间的相对比值，t test p值。 

需确认的信息： 

1.样品：

① 如果样品为蛋白质溶液，蛋白质总量≥300mg; 

② 如果是组织样品，样品总量≥0.1g； 如果是细胞样品，细胞数量≥107个；

③ 如果是体液样品，血清≥200ml，脑脊液≥200ml，尿液≥1ml，泪液≥1ml。

2.样品采集过程中使用到塑料制品时，尽量使用无色进口产品，以减少塑料制品中杂质对质谱检测的影响。