非标定量（Label-free）

非标定量（Label-free）：

非标定量是一种非标记的差异蛋白质组学技术，不需要使用同位素标记物标记肽段，直接根据质谱峰的信号强度来对肽段或蛋白进行相对定量。Label-free通过HPLC分级液质联用对酶解肽段进行分析，现在基于质谱的非标定量技术主要有两种：一是根据一级质谱相关的肽段峰强度以及峰面积等信息进行蛋白定量，二是根据蛋白对应肽段的二级质谱总数（spectral counts）进行定量。

采用稳定同位素标记定量的方法，能够精确的对蛋白表达水平进行定量分析。然而，标记定量的方法也存在某些不足之处：包括，额外的样品处理过程，昂贵的标记试剂，不完全标记导致样品复杂化，低丰度多肽难以检测，可标记样品数量有限等。作为替代，非标记定量技术（LFQ，label-free quantification）能够避免此类缺陷。

LFQ定量通常可采用两种方式：

（1）谱图计数法（Spectral counting），使用多肽被鉴定次数来代表对应多肽的相对含量，进而计算出对应蛋白的相对表达量；

（2）母离子强度（precursor ion intensity），提取鉴定到的多肽在一级质谱（MS1）中的色谱峰面积代表其相对含量，然后计算出对应蛋白的相对表达量。和标记定量技术不同在于：标记定量样品预先混合并同时进行LC-MS/MS检测，而LFQ技术要求每个样品独立进行制备和LC-MS/MS检测，因此准确性和通量弱于标记定量技术。

实验步骤

1.蛋白前期处理，包括去除核酸，蛋白纯化定量，SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳；

2.蛋白质胶内酶切；

3.多肽纯化；

4.多肽混合物的质谱分析，包括质谱鉴定和定量信息比较；

5.生信分析。

结果展示