ELISA（酶联接免疫吸附反应分析）是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合 起来的一种敏感性很高的实验技术。 由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种 试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。

实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即：用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法 以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法 服务。 

技术流程 

双抗体夹心法(检测未知抗原) 

1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml， 4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。

2、加样：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔 中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及 阳性对照孔)。

3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴 定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。

4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液 0.1ml，37℃ 10～30分钟。

5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml 6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内 颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜 色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上， 于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测 各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

间接法(检测未知抗体) 

1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1-10ug/ml， 每孔加 0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。

2、加样：加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述 已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空 白、阴性及阳性孔对照)

3、加酶标抗体：于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二 抗体(抗抗体)0.05ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一 遍用DDW洗涤。

4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底 物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。

5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml 6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果： 反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD 值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则 410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规 定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。 

结果展示：

实验完成周期及交付标准 ： 

1.实验周期：1-3天 

2.交付标准：ELISA检测原始OD值、ELISA检测标准曲线、ELISA检测目的蛋白浓度值、柱状图、实验报告（实验步骤、试 剂、仪器等）

客户须知 

1、液体类标本（细胞培养上清、组织匀浆、血清、血浆、尿液、胸水、腹水、脑脊液等）； 

2、样本保存：请尽早检测，2-8℃保存一天；需更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存。如需周期收集样本，请将样本及时 分装标号后，置-20℃或-70℃保存； 

3、请提前告诉我们：您样本的种属、样本数量、待测指标及其他特殊要求。 

报告内容及标准 

1、ELISA标准曲线；

2、详细的实验步骤； 

3、完整的实验报告（试剂耗材，实验方法，实验结果及结果说明）。