实验技术简介： 

体外神经细胞的培养已成为神经生物学研究中十分有用的技术手段。 

神经细胞培养的主要优点:

(1)分散培养的神经细胞在体外生长成熟后,能保持结构和功能上的某些特点, 而且长期培养能形成髓鞘和建立突触联系,这就提供了体内生长过程在体外重现的机会。 

(2)能在较长时间内直接观察活细胞的生长、分化、形态和功能变化,便于使用各种不同的技术方法如相差显微镜、荧光显 微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、同位素标记、原位杂交、免疫组化和电生理等手段进行研究。 

(3)易于施行物理（如缺血、缺氧）、化学和生物因子（如 神经营养因子）等实验条件, 观察条件变更对神经细胞的直接或间接作用。 

(4)便于从细胞和分子水平探讨某些神经疾病的发病机制，药物或各种因素对胚胎或新生动物神经细胞在生长、发育和分化等各方面的影响。 

一、液体配制：

硼酸硼砂缓冲液：0.05M四硼化钠45ml，0.2M硼酸55ml，pH8.4；

胰酶－EDTA消化液： 胰酶－0.125g；EDTA－0.2g；D-Hanks平衡盐液定容至100ml。

所用的培养板、培养瓶或玻片预先经 100μg/L多聚赖氨酸硼酸盐缓冲液于37℃包被4h，三蒸水洗三遍晾干备用。 

二、操作步骤如下： 

1、出生2 d SD大鼠麻醉后，碘酒、75％乙醇消毒腹部皮肤，依次剪开皮肤、肌肉、皮下筋膜，无菌操作下取出胚胎放入预冷的D-Hanks平衡盐液中。 

2、在解剖显微镜下分离并取出胚胎大脑皮层，除去脑膜，剪碎组织成约1mm3大小，加入胰酶-EDTA消化液并放入37℃孵箱内消化20min，中间摇晃一次。 

3、随后用滴管吸出组织转移到装有预冷的培养液（DMEM＋10％FBS）的离心管内终止消化液作用 5min。 

4、用滴管吸出组织转移到装有预冷的DMEM＋10％FBS的离心管内，用火焰抛光的巴斯德滴管吹打数次，静置后取上清吸到另一支离心管内。重复上述步骤2～3次。 

5、将所收集的上清经200目筛网过滤。 

6、过滤后的细胞悬液于800r/min离心5min，弃上清，管内加入新鲜培养液（DMEM＋20％FBS）并吹打成单细胞悬液。 

7、细胞计数，调整细胞密度按1.5×105/cm2种入6孔板内，放入CO2孵箱中培养。培养48h后换液并加入 Ara-C使其终浓度为1×10-5mM/L。Ara-C作用24h后全量换液。以后每隔3天半量换液一次。 

三、无菌操作的注意事项：

细胞原代培养一定要保持工作区的无菌清洁，先用紫外灯杀菌1h，操作前用75%乙醇消毒，穿上实验服，戴上口罩和帽子，操作时不能大声说话，双手戴上一次性橡胶手套，整个无菌操作都应该在酒精灯的周围进行。 

四、服务流程： 

1、 讨论分析实验方案 

2、 确定服务内容 

3、 签订服务合同 

4、 进行实验，定期向客户反馈 

5、 整理实验报告 

6、 完成合同内容 

7、 后续实验服务，进一步合作

五、细胞服务项目： 

收费标准/服务周期/提供结果： 

欢迎咨询详谈，我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。 

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